大鼠骺软骨细胞分离自骨骺生长板；骨骺生长板位于长骨两端骨骺和骨干之间的软骨组织，其中的骺软骨细胞可分裂、成熟、肥大，最终被骨组织所替换，对于长骨生长具有重要作用。幼稚的骺软骨细胞位于软骨组织的表层，单个分布、体积较小、呈椭圆形，长轴与软骨表面平行，越向深层的骺软骨细胞体积之间增大呈圆形，细胞核圆形或卵圆形，染色浅，细胞质弱嗜碱性，常见数量不一的脂滴。成熟的骺软骨细胞多2-8个成群分布于软骨陷窝内，这些骺软骨细胞由同一个母细胞分裂增殖而成，称为同源细胞群。电镜下，骺软骨细胞有突起和皱褶，细胞质内有大量的粗面内质网和发达的高尔基复合体及少量的线粒体。在组织切片中，骺软骨细胞收缩为不规则形，在软骨囊和细胞之间出现较大的腔隙。
软骨细胞在单层（2D）培养中的体外扩增必然会导致其去分化。软骨细胞会逆转为分化程度较低的细胞类型，原本合成的透明软骨相关蛋白——II型胶原蛋白（COL2）和聚集蛋白聚糖（ACAN），分别被 I 型胶原蛋白（COL1）和多功能蛋白聚糖（VCAN）取代。这些细胞外基质成分是纤维软骨的典型特征，细胞变成纤维软骨与透明软骨的混合物。有研究表明，软骨细胞特异性基因Ⅱ型胶原和蛋白聚糖在P0代细胞高表达，其表达量随传代次数增加而下降。P1、P2、P3、P4、P5代细胞Ⅱ型胶原的mRNA表达量分别为P0代细胞的87%、90%、67%、20%和3%，蛋白聚糖表达量分别是P0代细胞的60%、30%、23%、18%和10%（参考文献：《体外持续传代引起小鼠透明软骨细胞表型和细胞外基质平衡变化的研究》）；细胞形态由椭圆形、圆形、短梭形、多角形，逐步转变为可增殖的长梭形、成纤维样，表现出成纤维细胞样表型。体外培养中，通过水凝胶包封或破坏F-肌动蛋白细胞骨架等方式恢复细胞的圆形三维形态，可在一定程度上恢复软骨细胞表型，3D培养球形细胞形态似乎是软骨细胞表型不可或缺的特征。体外培养的软骨细胞对于研究其生理功能、药物作用以及各种致病因素作用下的病理生理改变具重要意义。
产品属性
产品名称 大鼠骺软骨细胞
组织来源 生长板组织
默认种属 SD大鼠，其他咨询
产品规格 5×10^5Cells/T25
培养基： 大鼠骺软骨细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每3-4天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 梭形、多角形
传代比例： 1:2
传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳
消化液： 0.25%胰蛋白酶
大鼠骺软骨细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测
实验室分离的大鼠骺软骨细胞，P0代经Ⅱ型胶原蛋白免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介
实验室分离的大鼠骺软骨细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化并软骨细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。
操作步骤
一、实验前准备
器械灭菌，配制 DMEM/F12 上皮培养基、0.1% 蛋白酶 + 胶原酶混合消化液、无菌 PBS；培养皿多聚赖氨酸包被。
准备麻醉用品、解剖板、细胞筛、离心管。
二、取材与预处理
大鼠麻醉处死，消毒颈部胸腔，逐层分离气管与主支气管，完整取出气道组织。
PBS 灌洗气道管腔 3 次冲除黏液与杂质，纵向剪开气管，刮取气道内侧上皮层，收集组织碎屑。
三、细胞分离与消化
上皮碎屑加入混合消化液，37℃消化 30min，每隔 10min 吹打一次。
血清培养基终止消化，吹打混匀细胞悬液。
过 200 目滤网过滤，收集滤液。
四、纯化与接种培养
离心弃上清，专用上皮培养基重悬细胞。
接种包被培养瓶，差速贴壁 1.5h 换液去除成纤维细胞。
隔日换液，待上皮细胞形成铺路石样单层后传代扩增纯化。
