大鼠虹膜色素上皮细胞分离自虹膜组织;虹膜是眼睛构造的一部分,属于眼球中层,位于血管膜的最前部;在睫状体前方虹膜,中心有一圆形开口,称为瞳孔,犹如相机当中可调整大小的光圈,内含色素决定眼睛的颜色。日间光线较为强烈时,虹膜会收蹜,只使一小束光线穿透瞳孔,进入眼睛;当进入黑暗环境中,虹膜就会往后退缩,使瞳孔变大,让更多的光线进入眼睛,多数的脊椎动物的眼睛都有虹膜。虹膜色素上皮细胞(IPE)是虹膜重要结构组成细胞之一,位于虹膜组织的后面,和视网膜色素上皮细胞(RPE)同样起源于神经外胚叶层,可能具有相似的生物学功能,因此对IPE的研究将为防治因RPE结构或功能异常而导致的眼底病提供新思路。
产品属性
产品名称 大鼠虹膜色素上皮细胞
组织来源 虹膜组织
默认种属 SD大鼠,其他咨询
产品规格 5×10^5Cells/T25
包被条件: 鼠尾胶原Ⅰ(2-5 μg/cm²)
培养基: 大鼠虹膜色素上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率: 每2-3天换液一次
生长特性: 贴壁
细胞形态: 上皮细胞样
传代比例: 1:2
传代特性: 可传1-2代
消化液: 0.25%胰蛋白酶
大鼠虹膜色素上皮细胞体外培养周期有限;建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测
实验室分离的大鼠虹膜色素上皮细胞经Cytokeratin-18免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介
实验室分离的大鼠虹膜色素上皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法,并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来,细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。
操作步骤
一、实验前准备
显微解剖器械灭菌;配制 0.2%Ⅱ 型胶原酶、DMEM 高糖完全培养基、无菌 PBS;200 目滤网。
选取幼龄 SD 大鼠(2~4 周龄),实验台面提前紫外灭菌。
二、取材与预处理
处死大鼠消毒后剥离四肢皮肤肌肉,截取股骨、胫骨两端骨骺端白色透明软骨组织,剔除骨膜、骨组织、韧带。
预冷 PBS 反复冲洗软骨组织,剪切成 1mm³ 极小组织碎块。
三、细胞分离与消化
软骨碎块加入 Ⅱ 型胶原酶,37℃摇床消化 2.5~3h 至组织基本消散。
加入完全培养基终止消化,反复吹打制备单细胞悬液。
滤网过滤残渣,收集细胞悬液。
四、纯化与接种培养
1000rpm 离心 5min,弃上清,完全培养基重悬细胞。
接种培养瓶,5% CO₂培养箱静置培养。
24h 换液,后续 2~3d 换液,细胞长满后传代,避免多次传代导致细胞去分化。
