大鼠海绵体平滑肌细胞分离自海绵体组织；海绵体，又称海绵体肌，是最硬的平滑肌和结缔组织。海绵体是一种勃起组织，外面包有坚厚的白膜，内部由结缔组织和平滑肌组成海绵状支架，其腔隙与血管相通。它主要包括海绵体内皮细胞、平滑肌细胞和成纤维细胞3种细胞成分。其中平滑肌细胞和成纤维细胞镶嵌于海绵体细胞外基质的胶原中，在消化海绵体组织时，胶原酶的作用主要是松解海绵体内皮细胞与基膜的联系，破坏海绵体内皮细胞间的紧密连接。因此可用胶原酶分离出海绵体平滑肌细胞。平滑肌，是非横纹肌的肌肉组织。分布在人体动脉和静脉血管壁、膀胱、子宫、男性和女性生殖道、消化道、呼吸道、眼睛的睫状肌和虹膜。平滑肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展，细胞形态大小不一，呈梭形、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形、居中；2周后细胞汇合，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏；细胞密度低时，常交织成网状；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快，4-6天即可汇合，并保持上述形态学特征和生长特点。
产品属性
产品名称 大鼠海绵体平滑肌细胞
简称 CCSMCs
组织来源 海绵体组织
默认种属 SD大鼠，其他咨询
产品规格 5×10^5Cells/T25
培养基： 大鼠海绵体平滑肌细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传3-5代左右；3代以内状态最佳
消化液： 0.25%胰蛋白酶
大鼠海绵体平滑肌细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测
实验室分离的大鼠海绵体平滑肌细胞经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介
实验室分离的大鼠海绵体平滑肌细胞采用胶原酶消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。
操作步骤
一、实验前准备
器械灭菌：眼科剪、弯剪、直镊、弯镊、手术刀、止血钳，高压灭菌烘干；超净台紫外照射 30min。
试剂配制：含 10% 胎牛血清 + 1% 双抗（青霉素 - 链霉素）DMEM 完全培养基；0.25% 胰蛋白酶 - EDTA 消化液；PBS 缓冲液（预冷）；75% 医用酒精。
耗材准备：培养皿、离心管、细胞培养瓶、滤网（200 目）、移液管、冻存管提前灭菌备用。
二、取材与预处理
颈椎脱臼处死 SD 大鼠，75% 酒精浸泡全身 5min 充分消毒，固定于解剖板。
沿下颌皮肤剪开，逐层剥离皮下组织与肌肉，完整分离上下颌骨，剔除附着肌肉、血管、牙体组织，预冷 PBS 反复漂洗 3 次去除血污。
将颌骨剪碎至 1mm³ 左右组织碎块，PBS 漂洗至液体无血色。
三、细胞分离与消化
组织碎块移入离心管，加入 0.25% 胰酶消化液，37℃水浴消化 20min，每 5min 轻柔颠倒混匀一次。
加入等量完全培养基终止胰酶消化，吹打悬液 30 次打散细胞团。
200 目细胞滤网过滤除去未消化组织残渣，收集滤液。
四、纯化与接种培养
滤液 1000r/min 离心 5min，弃上清，完全培养基重悬细胞沉淀。
细胞悬液接种于培养瓶，置于 37℃、5% CO₂恒温培养箱静置培养。
24h 后首次换液去除未贴壁杂细胞，后续每 2~3d 换液，细胞汇合 80% 即可传代纯化。
