大鼠肺成纤维细胞分离自肺组织；肺是机体的呼吸器官，位于胸腔，左右各一，覆盖于心之上。肺有分叶，左二右三，共五叶。肺经肺系（指气管、支气管等）与喉、鼻相连，故称喉为肺之门户，鼻为肺之外窍。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来；成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的肺成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30 min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6 h后细胞基本贴壁完全，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。肺成纤维细胞在生理条件下的主要功能包括：构造和维持肺器官的正常形态，合成和释放细胞外基质以及组织损伤后及时大量聚集修复损伤组织。
产品属性
产品名称 大鼠肺成纤维细胞
简称 LF
组织来源 肺组织
默认种属 SD大鼠，其他咨询
产品规格 5×10^5Cells/T25 / 5×10^5Cells/Vial
培养基： 大鼠肺成纤维细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳
消化液： 0.25%胰蛋白酶
大鼠肺成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测
实验室分离的大鼠肺成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介
实验室分离的大鼠肺成纤维细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。
操作步骤
一、实验前准备
器械：眼科剪、直弯镊、组织剪、止血钳、培养皿、15mL/50mL 离心管、滤网（100 目 + 200 目）、细胞培养瓶、移液管；器械高压灭菌烘干备用。
试剂：无菌 PBS（含双抗）、0.25% 胰蛋白酶 - EDTA 消化液、DMEM 完全培养基（10% 胎牛血清 + 1% 青霉素链霉素）、75% 医用酒精。
动物预处理：SD 大鼠（6~8 周龄）称重，腹腔注射水合氯醛麻醉；超净台紫外消毒 30min，操作台酒精擦拭。
二、取材与预处理
大鼠腹部朝上固定，75% 酒精全身浸泡消毒胸腹部，剪开胸腔暴露心肺，完整分离双肺，剔除气管、大血管、淋巴结及包膜结缔组织。
预冷无菌 PBS 反复漂洗肺组织 3~5 次，冲净肺内残血，剪去淤血发白坏死组织，转移至无菌培养皿。
三、细胞分离与消化
用眼科剪将肺组织反复剪碎至 1mm³ 左右组织糜，加入 5mL 预冷 PBS 吹打洗涤，静置弃上清去除红细胞。
加入 0.25% 胰酶消化液浸没组织块，37℃水浴消化 15~20min，每 5min 颠倒摇晃一次。
加入等体积完全培养基终止消化，反复轻柔吹打 10~15 次，依次过 100 目、200 目细胞筛，收集细胞悬液至离心管。
四、纯化与接种培养
1000r/min 离心 5min，弃上清，PBS 重悬离心洗涤 2 次去除胰酶与杂质。
完全培养基重悬细胞沉淀，计数调整细胞密度至 5×10⁵个 /mL，接种于 T25 培养瓶。
37℃、5% CO₂培养箱静置培养，24h 后换液去除未贴壁杂细胞；后续每 2~3d 换液，细胞汇合 80% 可传代。
