大鼠多巴胺神经元细胞分离自中脑组织;多巴胺神经元,即:胺能神经元,主要指含多巴胺的神经元,其细胞体主要分布在黑质、脚间核和丘脑下部等处。在这些区域多巴胺含量很高。多巴胺在机体内合成时以酪氨酸为原料。脑内的多巴胺主要是由黑质细胞来合成,这些多巴胺参与锥体外系统的活动,与躯体运动机能有密切关系。脑内多巴胺代谢失常时,可引起震颤性麻痹(帕金森震颤)。多巴胺(Dopamine),是NA的前体物质,是下丘脑和脑垂体腺中的一种关键神经递质,中枢神经系统中多巴胺的浓度受精神因素的影响,神经末梢的GnRH和多巴胺间存在着轴突联系并相互作用,以及多巴胺有抑制GnRH分泌的作用。中脑的神经原物质多巴胺(Dopamine),则直接影响人们的情绪。从理论上来看,增加这种物质,就能让人兴奋,但是它会令人上瘾。多巴胺在前脑和基底神经节(Basal Ganglia)出现,基底神经节负责处理恐惧的情绪,但由于多巴胺的缘故,取代了恐惧的感觉,因此有很多人的上瘾行为,都是因多巴胺而起的。
产品属性
产品名称 大鼠多巴胺神经元细胞
组织来源 中脑组织
默认种属 SD大鼠,其他咨询
产品规格 5×10^5Cells/T25
包被条件: PLL(0.1 mg/mL)
培养基: 大鼠多巴胺神经元细胞完全培养基(含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率: 每2-3天换液一次
生长特性: 贴壁
细胞形态: 神经元细胞样
传代比例: 不传代
传代特性: 属于终末分化细胞;属于不增殖细胞群
消化液: 0.125%胰蛋白酶
大鼠多巴胺神经元细胞体外培养周期有限;建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测
实验室分离的大鼠多巴胺神经元细胞经TH免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介
实验室分离的大鼠多巴胺神经元细胞采用胰蛋白酶消化法、神经元专用培养基培养筛选结合化学试剂抑制法制备而来,细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。
操作步骤
一、实验前准备
1. 试剂:预冷解剖液(HBSS + 双抗)、0.125% 胰酶、神经元专用培养基(Neurobasal+B27+GlutaMAX + 双抗)。
2. 培养板用多聚赖氨酸包被过夜,无菌漂洗晾干;显微解剖器械灭菌,全程冰上操作。
3. 选用孕 14~16d 胎鼠取材。
二、取材与预处理
1. 孕鼠麻醉剖腹,取出胚胎,剥离胚胎大脑,冰上解剖液中分离中脑腹侧脑组织(多巴胺神经元富集区)。
2. 剔除脑膜与血管,将目标脑组织转移至新预冷解剖液中,剪碎组织。
三、细胞分离与消化
1. 组织碎块加入胰酶消化液,37℃消化 15min,轻柔吹打 10~15 次制成单细胞悬液。
2. 加入含血清培养基终止消化,800r/min 低速离心 5min。
3. 弃上清,解剖液重悬洗涤 1 次。
四、纯化与接种培养
1. 细胞用神经元培养基重悬,调整密度至 8×10⁵个 /mL,接种于包被好的培养板。
2. 37℃5% CO₂培养,24h 后半量换液,后续每 3 天半量换液。
3. 第 3 天可加入阿糖胞苷抑制胶质细胞增殖纯化神经元,持续培养 7~10d 用于实验。
