大鼠成骨细胞分离自颅骨组织；颅骨位于脊柱上方，由23块形状和大小不同的扁骨和不规则骨组成。除下颌骨及舌骨外，其余各骨彼此借缝或软骨牢固连结，起着保护和支持脑、感觉器官以及消化器和呼吸器的起始部分的作用。颅分脑颅和面颅两部分。脑颅位于颅的后上部，内有颅腔，容纳脑，共8块。面颅为颅的前下部分，包含眶、鼻腔、口腔等结构，构成面部的支架，共15块。成骨细胞是骨形成的主要功能细胞，负责骨基质的合成、分泌和矿化。骨不断地进行着重建，骨重建过程包括破骨细胞贴附在旧骨区域，分泌酸性物质溶解矿物质，分泌蛋白酶消化骨基质，形成骨吸收陷窝；其后，成骨细胞移行至被吸收部位，分泌骨基质，骨基质矿化而形成新骨；破骨与成骨过程的平衡是维持正常骨量的关键。成骨细胞培养不仅有助于了解骨形成机制、骨骼系统疾病的分子和细胞学基础，也是药物筛选、生物材料开发和生物工程研究的重要手段。
产品属性
产品名称 大鼠成骨细胞
组织来源 颅骨组织
默认种属 SD大鼠，其他咨询
产品规格 5×10^5Cells/T25 / 5×10^5Cells/Vial
培养基： 大鼠成骨细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 梭形、多角形
传代比例： 1:2
传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳
消化液： 0.25%胰蛋白酶
大鼠成骨细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测
实验室分离的大鼠成骨细胞经ALP染色检测，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介
实验室分离的大鼠成骨细胞采用先用胰蛋白酶短时间消化、后用胶原酶反复消化制备而来，细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。
操作步骤
一、实验前准备
1. 试剂：预冷 PBS（双抗）、0.25% 胰酶、0.1%Ⅰ 型胶原酶、成骨完全培养基（α-MEM+15% 胎牛血清 + 双抗）。
2. 器械：骨剪、精细镊子、培养皿、离心管、滤网高压灭菌；超净台消毒。
3. 选用新生 24h 内乳鼠，活性最佳。
二、取材与预处理
1. 乳鼠脱颈处死，75% 酒精浸泡 5min 消毒，剥离颅骨、股骨、胫骨，剔除附着肌肉、筋膜、骨膜外软组织。
2. 预冷 PBS 浸泡骨组织，刮除表面骨膜，剪碎骨块至 1mm³ 骨粒。
三、细胞分离与消化
1. 骨粒加入 0.1%Ⅰ 型胶原酶，37℃消化 20min 弃第一次消化液（去除成纤维细胞）。
2. 再次加入胶原酶消化液，37℃分次消化 3 次，每次 30min，分次收集上清。
3. 合并所有上清，加入培养基终止消化，1000r/min 离心 5min 收集细胞。
四、纯化与接种培养
1. PBS 洗涤沉淀 2 次，完全培养基重悬单细胞悬液。
2. 接种于培养瓶，37℃培养箱静置培养，48h 首次换液去除未贴壁杂质。
3. 每 2~3 天换液，细胞长满 85%~90% 使用胰酶消化传代；可加 β- 甘油磷酸钠、维生素 C 诱导矿化。
