大鼠肠神经嵴干细胞分离自全肠组织；神经嵴干细胞（neural crest stem cells, NCSC），即外周神经系统干细胞，起源于胚胎期的神经管背侧，与中枢神经系统干细胞在形态学上有着显著不同，NCSC可表达低亲和力神经营养因子受体p75NTR而不能分化出少突胶质细胞，而中枢神经系统干细胞与之恰好相反。NCSC可在不同部位分化出多种组织，如神经元、神经胶质、黑色素细胞、内分泌细胞、平滑肌、骨骼肌及骨等，其中可特异性分化出肠神经系统中神经元和神经胶质的NCSC，被称为肠神经嵴干细胞（gut neural crest stem cells, GNCSC）。
产品属性
产品名称 大鼠肠神经嵴干细胞
组织来源 全肠组织
默认种属 SD大鼠，其他咨询
产品规格 5×10^5Cells/T25
培养基： 大鼠肠神经嵴干细胞完全培养基(含B-27 Supplement、EGF、bFGF、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 悬浮
细胞形态： 球形
传代比例： 1:2
传代特性： 可传1-3代左右；3代以内状态最佳
消化液： Accutase消化液或0.25%胰蛋白酶
大鼠肠神经嵴干细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测
实验室分离的大鼠肠神经嵴干细胞经Nestin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介
实验室分离的大鼠肠神经嵴干细胞采用中性蛋白酶-胶原酶联合消化法制备而来，细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。
操作步骤
一、实验前准备
1. 试剂：预冷无菌 PBS（双抗）、0.05% 胰酶 + 0.02% EDTA 消化液、神经干细胞专用增殖培养基（DMEM/F12+B27+EGF+bFGF + 双抗）、多聚赖氨酸包被培养皿。
2. 器械：无菌解剖器械、筛网、离心管，超净台、37℃水浴提前消杀预热。
3. 耗材提前包被：培养皿用多聚赖氨酸室温包被 2h，PBS 漂洗晾干备用。
二、取材与预处理
1. 新生 1~3d 乳鼠麻醉处死，腹部消毒开腹，截取小肠全长，剥离肠系膜与多余结缔组织。
2. 冰上预冷 PBS 反复冲洗肠管内部，纵向剖开肠壁，仔细剥离肠外肌间神经丛所在组织，剔除黏膜层。
3. 目标组织置于冰 PBS 中剪碎至 0.5~1mm³ 组织块。
三、细胞分离与消化
1. 组织块加入胰酶 - EDTA 消化液，37℃消化 15~20min，间断吹打分散组织。
2. 加入含血清基础培养基终止消化，800r/min 离心 6min 弃上清。
3. PBS 重悬沉淀洗涤 2 次，充分去除胰酶残留。
四、纯化与接种培养
1. 悬液过 200 目滤网，离心收集单细胞沉淀，干细胞增殖培养基重悬。
2. 按 5×10⁴个 /mL 接种于包被好的培养皿，悬浮培养形成神经球。
3. 每 3 天半量换液，7d 可收集神经球传代；诱导分化时更换分化培养基，贴壁培养即可定向分化。
