大鼠肠微血管内皮细胞分离自全肠组织;肠道指的是从胃幽门至肛门的消化管。肠是消化管中最长的一段,也是功能最重要的一段。哺乳动物的肠包括小肠、大肠和直肠3大段。大量的消化作用和几乎全部消化产物的吸收都是在小肠内进行的,大肠主要浓缩食物残渣,形成粪便,再通过直肠经肛门排出体外。肠道堪称身体最劳累的器官——每天不停地消化、吸收食物,以提供足够的养分,其实它的功能还远不止此——它还是机体内最大的微生态系统。微血管是极细微的血管,管径平均为6-9 μm,连于动、静脉之间,互相连接成网状。微血管壁薄,管径较小,血流很慢,通透性大。其功能是利于血液与组织之间进行物质交换。其管壁主要由一层内皮细胞构成,在内皮外面有一薄层结缔组织。另外还常可见到一种扁而有突起的细胞贴在微血管的管壁外面,称为周细胞。
产品属性
产品名称 大鼠肠微血管内皮细胞
组织来源 全肠组织
默认种属 SD大鼠,其他咨询
产品规格 5×10^5Cells/T25
包被条件: PLL(0.1 mg/mL)或明胶(0.1%)
培养基: 大鼠肠微血管内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率: 每2-3天换液一次
生长特性: 贴壁
细胞形态: 内皮细胞样
传代比例: 1:2
传代特性: 可传2-3代
消化液: 0.25%胰蛋白酶
大鼠肠微血管内皮细胞体外培养周期有限;建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测
实验室分离的大鼠肠微血管内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介
实验室分离的大鼠肠微血管内皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来,细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。
操作步骤
一、实验前准备
1. 试剂:无菌 PBS、0.1%Ⅰ 型胶原酶、内皮细胞专用完全培养基(ECM+10% FBS + 内皮生长添加剂 + 双抗)、明胶(0.1%)包被液。
2. 耗材:培养瓶提前用 0.1% 明胶 37℃包被 30min,弃液晾干灭菌;解剖器械、滤网灭菌。
3. 设备:超净台紫外消毒,水浴 37℃预热。
二、取材与预处理
1. 成年 SD 大鼠麻醉处死,无菌取小肠组织,冰 PBS 冲洗肠腔内容物,剥离肠系膜细小血管网。
2. 剔除大块脂肪与结缔组织,仅保留肠系膜微血管组织,PBS 漂洗至无血色。
3. 将微血管剪切成糊状细小组织碎屑。
三、细胞分离与消化
1. 组织加入 Ⅰ 型胶原酶消化液,37℃摇床消化 45~60min,每隔 10min 吹打混匀。
2. 血清培养基终止消化,1200r/min 离心 5min 弃上清。
3. PBS 洗涤细胞沉淀 2 次。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液过 200 目筛网,离心后内皮专用培养基重悬细胞。
2. 接种至明胶包被培养瓶,密度 1.5×10⁵个 /mL,37℃CO₂培养箱培养。
3. 24h 换液去除杂细胞与组织碎片,后续隔天换液;采用差速贴壁法纯化,成纤维细胞先贴壁,30min 后转移上清至新培养瓶获得纯内皮细胞
