大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞分离自肺组织；肺泡由单层上皮细胞构成的半球状囊泡。肺中的支气管经多次反复分枝成无数细支气管，它们的末端膨大成囊，囊的四周有很多突出的小囊泡，即为肺泡。小肺泡细胞，又称I型肺泡细胞，厚约0.1微米，基底部是基底膜，无增殖能力。大肺泡细胞，又称Ⅱ型肺泡细胞，分泌表面活性物质（二棕榈酰卵磷脂），以降低肺泡表面张力。Ⅱ型肺泡细胞位于Ⅰ型肺泡细胞之间，数量较Ⅰ型肺泡细胞多，但覆盖面积比Ⅰ型肺泡细胞小。细胞立方形或圆形,顶端突入肺泡腔。细胞核圆形，胞质着色浅、呈泡沫状。电镜下，细胞游离而有少量微绒毛，胞质内富含线粒体和溶酶体，有较发达的粗面内质网和高尔基复合体。核上方有较多的分泌颗粒，电子密度高、大小不等，直径约0.1-1.0 μm颗粒内含有平行排列的板层状结构，称为嗜饿性板层小体。小体内的主要成分为磷脂，以二棕榈酰卵磷脂为主，此外还有糖胺多糖及蛋白质等。颗粒内物质释放出来后，在肺泡表面形成一层粘液层，称为表面活性物质（surfactant）。表面活性物质有降低肺泡表面张力、稳定肺泡大小的作用。呼气时肺泡缩小，表面活性物质密度增加，表面张力降低，防止肺泡过度塌陷；吸气时肺泡扩张，表面活性物质密度减小，肺泡回缩力加大，可防止肺泡过度膨胀。表面活性物质的缺乏或变性均可引起肺不张，过度通气可造成表面活性物质缺乏；吸入毒气可直接破坏表面活性物质。Ⅱ型肺泡细胞有分裂、增殖并分化为Ⅰ型肺泡细胞的潜能，故具有修复受损伤上皮的作用。
产品属性
产品名称 大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞
组织来源 肺组织
默认种属 SD大鼠，其他咨询
产品规格 5×10^5Cells/T25
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 上皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传1-2代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测
实验室分离的大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞经SP-C免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介
实验室分离的大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。
操作步骤
一、实验前准备
1. 试剂：无菌 PBS、0.25% 胰蛋白酶 - EDTA、胶原酶 I、DNase I、DMEM/F12 完全培养基（10% 胎牛血清 + 双抗 + 谷氨酰胺）、红细胞裂解液、75% 医用酒精。
2. 器械：无菌解剖剪、镊子、血管钳、灌胃针、培养皿、离心管、细胞筛（100 目 + 200 目）、培养瓶。
3. 动物：SPF 级 SD 大鼠（4~6 周龄），术前紫外消毒超净台 30min，器械高温灭菌烘干。
4. 耗材提前分装分装消化液、冲洗液，37℃水浴预热培养基与消化酶。
二、取材与预处理
1. 大鼠腹腔注射过量戊巴比妥麻醉，75% 酒精浸泡全身消毒，固定于解剖板。
2. 打开胸腔，暴露气管与双肺，剪开右心耳放血，经气管缓慢注入预冷无菌 PBS 灌洗肺组织，直至肺叶发白无血渍。
3. 完整摘取双肺，置于预冷无菌 PBS 培养皿中，剔除气管、结缔组织、血管杂质。
4. 剪碎肺组织至 1mm³ 细小组织碎块，PBS 反复漂洗 3 次，去除血细胞与黏液。
三、细胞分离与消化
1. 加入胶原酶 I+DNase I 混合消化液，浸没组织块，37℃摇床低速消化 30~40min，每 10min 轻柔吹打一次。
2. 终止消化：加入等量含血清完全培养基中和酶活性，反复吹打混悬组织悬液。
3. 依次过 100 目、200 目细胞筛去除未消化组织残渣，滤液转入离心管，1200r/min 离心 8min，弃上清。
四、纯化与接种培养
1. 沉淀加入红细胞裂解液室温裂解 3min，PBS 重悬离心洗涤 2 次。
2. 差速贴壁纯化：细胞悬液接种至培养瓶，37℃孵育 1h，倒掉上清（去除成纤维细胞），剩余悬液重新收集离心。
3. 用完全培养基重悬细胞，调整细胞密度 5×10⁵个 /mL 接种培养瓶，37℃5% CO₂培养箱培养，24h 首次换液，后续每 2~3d 换液。
