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大鼠肝星状细胞

大鼠肝星状细胞

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产品概述 product description

大鼠肝星状细胞分离自肝脏组织;肝脏是身体内以代谢功能为主的一个器官,并在身体里面起着去氧化、储存肝糖、分泌性蛋白质的合成等作用;肝脏也制造消化系统中之胆汁。肝脏是机体内脏里最大的器官,位于机体中的腹部位置,在右侧横隔膜之下,位于胆囊之前端且于右边肾脏的前方,胃的上方。肝脏是机体消化系统中最大的消化腺,为一红棕色的V字形器官。肝脏是尿素合成的主要器官,又是新陈代谢的重要器官。肝脏在机体位置和形态结构:肝脏位于右上腹,隐藏在右侧膈下和肋骨深面,大部分肝为肋弓所复盖,仅在腹上区、右肋弓间露出并直接接触腹前壁,肝上面则与膈及腹前壁相接。肝星状细胞(HSC)又名肝贮脂细胞、维生素A贮存细胞、窦周细胞、Ito细胞等,是肝脏细胞外基质的主要来源。HSC在激活后可进一步转化为肌成纤维细胞样细胞,各种可导致肝纤维化的因素均将HSC作为最终靶细胞。正常情况下,HSC处于静止状态,当肝脏发生炎症反应或受到机械刺激等损伤时,HSC的表型由静止型转变为激活型,激活的HSC可通过增生和分泌细胞外基质参与肝纤维化的形成及肝内结构的重建,此过程也是肝纤维化的中心环节。肝星状细胞分布于肝脏的Disse间隙内,是合成、分泌细胞外基质的主要来源,在肝纤维化的发生中处于最重要地位。肝星状细胞是肝脏特有的间充质细胞,约占肝脏细胞总数的8%-13%。作为肝脏合成细胞外基质的主要细胞群,肝星状细胞不仅能分泌蛋白多糖、糖蛋白等细胞外基质成分,合成一定量的胶原酶以维持正常的基底膜结构,还能通过其突起的收缩参与肝窦的微循环调节。此外,肝星状细胞能通过合成肝细胞生长因子、胰岛素样生长因子、表皮生长因子等促进肝细胞增殖和肝再生。

产品属性
产品名称 大鼠肝星状细胞
组织来源 肝脏组织
默认种属 SD大鼠,其他咨询
产品规格 5×10^5Cells/T25 / 5×10^5Cells/Vial
培养基: 大鼠肝星状细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率: 每2-3天换液一次
生长特性: 贴壁
细胞形态: 成纤维细胞样
传代比例: 1:2
传代特性: 可传5代左右;3代以内状态最佳
消化液: 0.25%胰蛋白酶
大鼠肝星状细胞体外培养周期有限;建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测
质量检测 实验室分离的大鼠肝星状细胞经α-SMA或Desmin免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介
方法简介 实验室分离的大鼠肝星状细胞采用混合酶灌流消化、低速离心、密度梯度离心制备而来,细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。
操作步骤
一、实验前准备
试剂 前灌液、Ⅳ 型胶原酶肝灌流液、DNaseⅠ 消化液、18% OptiPrep 密度梯度分离液、DMEM 完全培养基(10% FBS + 双抗)、无钙镁 HBSS。
器材 蠕动泵、门静脉插管、解剖器械、15/50mL 离心管、400 目细胞筛、超速离心配套离心管。
雄性 SD 大鼠禁食过夜,超净台及器械灭菌。
二、取材与预处理
麻醉大鼠,开腹门静脉插管,下腔静脉放血,预灌液灌流肝脏至完全脱色。
胶原酶循环灌流消化肝脏 15min,摘取肝脏剪碎,转入含 DNaseⅠ 的消化液中 37℃水浴摇床消化 20min。
消化后组织悬液吹打打散,过 200 目筛网,收集细胞悬液。
三、细胞分离与消化
细胞悬液 700×g 离心 7min,弃上清,HBSS 重悬洗涤沉淀 2 次。
配制梯度液:底层铺 18% OptiPrep 分离液,上层缓慢铺细胞悬液,避免液面混合。
1800×g 4℃超速离心 17min,离心后分层,中层白膜层即为肝星状细胞富集层。
四、纯化与接种培养
小心吸取中间层细胞,加入 HBSS 稀释,600×g 离心 5min 洗去分离介质,重复洗涤 2 次。
完全培养基重悬计数,接种密度 2×10⁵个 /mL 接种培养瓶,37℃培养。
培养 24h 换液去除漂浮杂质;原代静息型 HSC 含脂滴呈透亮圆形,3~5 天自发活化呈肌成纤维样,每 2 天换液。