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大鼠肝实质细胞

大鼠肝实质细胞

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产品概述 product description

大鼠肝实质细胞分离自肝脏组织;肝脏是身体内以代谢功能为主的一个器官,并在身体里面起着去氧化、储存肝糖、分泌性蛋白质的合成等作用;肝脏也制造消化系统中之胆汁。肝脏是机体内脏里最大的器官,位于机体中的腹部位置,在右侧横隔膜之下,位于胆囊之前端且于右边肾脏的前方,胃的上方。肝脏是机体消化系统中最大的消化腺,为一红棕色的V字形器官。肝脏是尿素合成的主要器官,又是新陈代谢的重要器官。肝脏在机体位置和形态结构:肝脏位于右上腹,隐藏在右侧膈下和肋骨深面,大部分肝为肋弓所复盖,仅在腹上区、右肋弓间露出并直接接触腹前壁,肝上面则与膈及腹前壁相接。肝实质细胞是指具有肝功能的单位,是肝脏的基本组成单位之一。肝实质细胞与主要病生理变化:急性肝炎、肝硬化、肝脓肿。肝实质细胞属于中高度分化细胞,生长营养需求高,在体外存活时间短;细胞呈圆形或多角形,核大而圆,居中,常染色质丰富,部分有双核或多倍体核。肝脏作为体内重要的器官,在整个物质代谢过程中具有广泛而多样的作用。

产品属性
产品名称 大鼠肝实质细胞
组织来源 肝脏组织
默认种属 SD大鼠,其他咨询
产品规格 5×10^5Cells/T25
包被条件: 鼠尾胶原Ⅰ(2-5 μg/cm²)
培养基: 大鼠肝实质细胞完全培养基(基础培养基,含FBS、Insulin、Dexamethasone、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率: 每2-3天换液一次
生长特性: 贴壁
细胞形态: 上皮细胞样
传代比例: 不传代
传代特性: 不建议传代
消化液: 0.25%胰蛋白酶
大鼠肝实质细胞体外培养周期有限;建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测
质量检测 实验室分离的大鼠肝实质细胞经Cytokeratin-18免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介
方法简介 实验室分离的大鼠肝实质细胞采用混合酶灌流消化、反复低速离心制备而来,细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。
操作步骤
一、实验前准备
试剂配制
预灌液(无钙镁 HBSS+0.5mM EGTA+10mM HEPES,pH7.4,4℃预冷);
胶原酶消化液(含钙镁 HBSS+0.05%Ⅳ 型胶原酶 + 10mM HEPES,现配 37℃预热);
完全培养基:DMEM 高糖 + 10% 胎牛血清 + 1% 双抗 + 1mM L - 谷氨酰胺;
75% 医用酒精、PBS 缓冲液、台盼蓝染液。
器械与耗材 手术剪、弯镊、血管钳、留置针、蠕动泵、无菌培养皿、离心管、细胞筛(100 目 + 200 目)、培养瓶;器械高压灭菌烘干备用。
动物预处理 SD 大鼠(雄性 8~12 周)术前禁食 12~16h,自由饮水,减少肝内糖原,提升细胞活率;超净台紫外消毒 30min。
二、取材与预处理
大鼠腹腔注射 3% 戊巴比妥钠麻醉(50mg/kg),固定于解剖板,腹部体毛 75% 酒精充分消毒。
剪开腹腔暴露门静脉与下腔静脉,门静脉插管固定,剪断下腔静脉作为流出通道,立即开启蠕动泵灌注预灌液。
持续灌流至肝脏由暗红色完全褪成土黄色,停止预灌,更换胶原酶消化液循环灌流 8~12min,肝脏膨大发软、包膜起皱即可停止。
完整摘取肝脏置于无菌培养皿,小心剥离肝包膜与结缔组织,剪碎肝组织。
三、细胞分离与消化
剪碎肝组织加入少量预热胶原酶液,轻轻吹打 3~5min,松散组织团块。
混合悬液依次过 100 目、200 目无菌细胞筛,去除未消化组织残渣,收集滤液至 50mL 离心管。
4℃、50×g 低速离心 3min,弃上清(去除非实质细胞、碎片),沉淀用预冷无血清培养基重悬重复低速离心 2 次。
四、纯化与接种培养
沉淀用完全培养基重悬,台盼蓝计数,活细胞率>85% 为合格。
接种密度 5×10⁵~1×10⁶个 /cm² 接种于胶原包被培养瓶 / 板,置于 37℃、5% CO₂培养箱。
接种 4h 后首次换液,去除未贴壁死细胞与杂细胞;后续每 24h 更换一次完全培养基,肝细胞可短期培养 3~7 天。